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ELISA服務簡介

ELISA是指以酶作為標記物、以抗原和抗體之間免疫結合反應為基礎的固相吸附測定方法。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。

按試劑盒說明書進行操作，不同指標操作不一樣。具體以訂購的試劑盒說明書為準。基本步驟如下：

　　1.包被：用碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1-10μg/ml。在聚苯乙烯酶標板的每孔加100μl，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3min。(一般商品化的試劑盒中已包被好抗體，此步驟可省略)

　　2.封閉：每孔加入200ul封閉液，37℃或室溫孵育1-2 h。

　　3.洗滌：小心揭掉封板膜，放入洗板機，洗滌3-5遍。也可以手動洗板：棄去液體，每孔加入300ul洗液，浸泡1-2min，在吸水紙上拍干，重復3-5遍。(一般商品化的試劑盒中已包被好抗體，前三個步驟可省略)

　　4.加樣：加適當稀釋的待檢樣品100μl于上述已包被的反應孔中。(同時做空白孔，倍比稀釋的標準品孔，有條件可加做陰性對照孔及陽性對照孔作為質控點)。

　　5.溫育：用封板膜封板后置37℃孵育1-2 h。

　　6.洗滌：同步驟3。

　　7.加抗體：于各孔中加稀釋好的生物素化抗體工作液100 μl。

　　8.溫育：用封板膜封板后置37℃孵育1 h。

　　9.洗滌：同步驟3。

　　10.加酶結合物：于各孔中加稀釋好的酶結合物工作液100 μl。

　　11.溫育：用封板膜封板后置37℃避光孵育30 min。

　　12.洗滌：同步驟3。

　　13.加顯色底物：于各孔中加入TMB底物溶液100 μl，37℃避光反應10～30min，直到倍比稀釋的標準品孔出現明顯的顏色梯度為止。

　　14.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸100 μl，顏色由藍色變?yōu)辄S色。

　　15.結果測定：10min內，在酶標儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值。

技術服務內容

客戶須知 
ELISA試劑盒自備（建議定購*試劑盒，也可委托我們代購）。

實驗周期

7個工作日內（具體實驗周期視實驗方案而異）

服務承諾

提供實驗方法、步驟、所用試劑、儀器及相關分析數據。